Animal Science
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Partial substitution of commercial concentrate for Azolla filiculoides meal in the productive response of Oryctolagus cuniculus
Y. Méndez-Martínez [1] [*]
[1] Facultad de Ciencias Pecuarias, Universidad Técnica Estatal de Quevedo (UTEQ), Quevedo, Los Ríos, Ecuador
[2] Centro de Estudio de Producción Animal, Facultad de Ciencias Agropecuarias Universidad de Granma (UDG), Bayamo, Granma, Cuba
  
					[*] Email:ymendezmartinez@gmail.com
				
ABSTRACT
In order to evaluate the effect of partial substitution of commercial concentrate (CC) for Azolla filiculoides (HA) meal in rabbit productive indicators (Oryctolagus cuniculus),
 a completely randomized design was used with 48 animals of 35 days old 
and mean weight of 646.3 ± 9.5 g. This study was carried out in Río 
Cauto municipality, Granma province, Cuba. Four treatments were used, 
consisting of 0, 6, 12 and 18% substitution of balanced feed for Azolla 
meal. Each treatment consisted of three replications and these with four
 experimental units in a simple classification design. Azolla meal 
showed 20.74 and 19.34 % of crude protein and fiber, respectively, as 
well as an adequate amino acid composition, highlighting methionine and 
leusin values of 14 and 38 g/kg CP, respectively. DM, CP and EM intake 
was superior for the commercial concentrate with 6,849 g, 1,205 g and 
849.98 MJ/kg of DM, respectively. For the increase of liveweight, the 
best values belonged to the control treatment and to 12% of HA 
inclusion, with 2,276.11 and 2,258.78g, respectively. Something similar 
occurred for total mean gain with 27.32 g for CC and 27.05 g for the 12%
 inclusion treatment. Azolla meal has a suitable chemical composition to
 be used in the feeding of rabbits. The inclusion of up to 12% of this 
meal in the ration for rabbits did not affect the productive indicators 
evaluated.
Key words: 
				
feeding; composition; conversion; gain; weight.
 			
				
Plant
 productivity ifs determined by a group of factors inherent to plant and
 external factors. The first group includes their biological 
characteristics and the second is composed by soil, climate and 
management (Herrera et al. 2017). 
These aspects are particularly important nowadays, due to the high price
 of raw materials for the production of concentrated foods and 
fertilizers (Friedrich 2014).
The
 search for alternative foods for animal production, aimed at the use of
 available natural resources, is an important aspect to be taken into 
account nowadays (Arorav and Singh 2003) and
 establishes one of the greatest challenges in finding protein sources 
of easy acquisition, able to cover nutritional needs of non-ruminant 
species at low costs. Among the possible alternatives are the aquatic 
macrophytes such as Azolla, with promising results (Narayan 2011).
 In general, these plants are present in the tropics and can be useful 
for the development of appropriate and profitable systems from the 
environmental, economic and human point of view. In addition, the 
inclusion of this plant in the monogastric diet may have an important 
function, because it has between 17 and 18 % protein, low fiber content 
(34 % neutral detergent fiber - NDF) and around 90 % of dry matter 
digestibility (Buenaño et al. 2018).
On
 the other hand, rabbit production constitutes an important alternative 
for obtaining protein for human consumption, due to its high 
prolificacy, low generational interval and high meat yield, with low 
cholesterol content (Petracci and Cavani 2013).
 However, rabbit feeding faces several problems, among which the low 
availability of cheap inputs, as well as the high cost of commercial 
concentrated foods, which encourages the search for strategies based on 
the use of unconventional raw materials (Silva 2016). Therefore, the objective of this study was to determine the chemical composition of Azolla filiculoides
 meal and to evaluate productive indicators in rabbits, by replacing 
part of the commercial concentrate with this plant in the diet.
Location of the study area. The experiment was carried out between February and July, in Río Cauto municipality, Granma province, Cuba.
Cultivation of the Azolla and meal production (HA).
 For the production of Azolla, two pools, each with 7 m wide, 10 m long 
and 1.30 m deep, were installed and represented a total area of 140 m2. 
In each pool, 200 g/m2 of Arzolla fresh material were planted and 65 kg 
of cow manure was deposited in different parts of each deposit. The 
harvest was manually carried out, with intervals of 7 days, once it was 
found that the entire surface of the pond was covered by a green 
biomass, characteristic of the cultivated species (Méndez et al. 2018a).
A
 75 % of the plants was harvested and dried in the sun for 72 hours on 
polyethylene blankets, with a total surface area of 16 m2 for drying. 
Around 6 or 7 flips were made from 7:00 a.m. up to 7:00 p.m. They were 
crushed using a hammer mill with 0.8 cm screen. The obtained material 
was packed in polyethylene bags and stored in a room at room 
temperature.
Commercial concentrate (CC). 
This was acquired in Fábrica de Piensos de Bayamo (certified), through 
the Empresa de Ganado Menor (EGAME, initials in Spanish) formulated for 
the feeding of rabbits and its chemical composition appears in table 1.
Experimental procedure.
 Forty eight Pardo cubano weaned male animals from Pardo cubano breed 
were selected. These animals were clinically healthy, with 38 ± 3 days 
of age and average initial weight of 646.6 ± 9.5g, and underwent 15 days
 of adaptation to the feeding change to avoid alterations due to stress 
they may suffer in this first stage. The experiment lasted 60 days.
				
Table 1. 
			
Chemical composition of commercial concentrate expressed in percentage
Treatments and experimental design. 
Nutrient balance of each treatment was carried out for the substitution 
of different levels of the commercial concentrate (0, 8, 12 and 18 %) 
for Azolla filiculoides meal. A completely randomized design was 
used, divided into four groups, with three replicates each and four 
animals as experimental units. Treatments were: T0, 100 % commercial 
concentrate; T1, 94 % of commercial concentrate and 6 of Azolla meal (94
 % CC + 6 HA); T2, 88 % of commercial concentrate and 12 of Azolla meal 
(88 % CC + 12 HA) and T3, 82 % of commercial concentrate and 18 of 
Azolla meal (82 % CC + 18 HA).
Food management.
 Food supply was performed twice a day (8:30 a.m. and 5:00 p.m.). To 
this end, circular clay feeders with a diameter of 15 cm and a height of
 7 cm were used. Calculations were made weekly to adjust food intake (HA
 and CC) in correspondence with 9 % of the live weight (Maertens and Villamide 1998), also complying with the intake regulations described by NRC (1990) (table 2).
				
Table 2. 
			
Requirements of animals and contributions of experimental diets
Water was offered ad libitum, using 
circular clay containers with a dimension of 16 cm of inferior diameter,
 13 cm of superior and 7 cm in height, with a capacity to store a volume
 of liquid equal to 800 mL ± 200. They were daily washed and placed in 
the sun every two days to avoid pathogen proliferation.
Variables evaluated for Azolla meal.
 Dry matter (DM), crude protein (CP), fiber (CF), ether extract (EE), 
ash, nitrogen-free extract (NFE), Ca and P were determined, according to
 AOAC (2016), and metabolizable energy estimated regarding NRC (1990).
 In addition, amino acids like threonine, valine, methionine, 
isoleucine, leucine, lysine, histidine, arginine and tryptophan were 
quantified (Dewanji 1993). Each sample was analyzed in triplicate.
Indicators evaluated in animals.
 The experimental phase was 60 days long and the initial, partial and 
final live weight, average daily gain and food conversion were 
determined. The weighing of animals (0,15, 30, 45 and 60 days) and of 
food was carried out from 8:00 am to 9:00 am, in scales with precision 
of 0.1 g. The productive indicators for this category were individually 
measured.
Mean gain was calculated by the 
difference between the final weight (FW) and the initial weight (IW) 
divided by the time according to: MG = (FW - IW)/time The increase in 
daily weight was established by the formula: DWI = FW - IW
Food
 intake (FI) was calculated by the difference of the offer minus the 
rejection, weighed twice a day (7:00 am and 4:00 pm) according to: FI = 
Food supplied - Food rejected
Food efficiency (FE) referred to weight gain in relation to food consumed according to: FE = Weight gained/Intake.
Food
 conversion factor (FCF) was referred to as the food consumed in 
relation to weight gain, by: FCF = Food consumed / Weight gain
Statistical analysis.
 Data was processed by simple classification variance analysis with a 
significance level of p <0.05. Kolmogorov-Smirnov test (Massey 1951) was used to verify data normality and the homogeneity of variances was determined by Bartlett (Bartlett 1937) test. The multiple comparison of adjusted means was performed by Duncan (1955) test.
Results of the chemical composition of Azolla meal (table 3)
 showed high DM values, a component that guarantees that this plant in 
the form of meal can be conserved and stored for feeding rabbits. On the
 other hand, high CP content appears, with the presence of important 
amino acids for the species, as well as values of metabolizable energy 
and crude fiber. 
				
Table 3. 
			
Chemical composition of Azolla filiculoides meal, expressed in percentage
The plant presented a good balance of 
essential amino acids, of great importance for the development and 
growth of the species under study, as well as coming from a cheaper 
source than the commercial concentrate.
Intake of dry matter and nutrients (CP, ME) showed differences among the evaluated treatments (table 4)
 for the concentrate and for the HA. For the specific case of DM, the 
highest intakes appear for treatments T1 and T2, without differences 
between them and with the rest. However, the highest intake for HA was 
shown by T3, where the highest inclusion percentage appears. For total 
CP intake, the highest value was presented by control treatment, with 
significant differences with respect to the rest. Similar performance 
appears when evaluating only the concentrate. For the specific case of 
HA, the highest value appears for T3. When evaluating DM intake, similar
 results to those of crude protein were shown.
				
Table 4. 
			
Intake of dry matter and nutrients (CP and ME) of commercial concentration (CC) and HA. 

 abcd Different letters in the same column indicate significant differences for (p< 0.05) according to Duncan (1955)
							
In weight increase as the experiment progressed, it could be seen (table 5)
 that the initial weights showed no differences among them. However, 
after 15 days, the best results were presented by control and T2 
treatment, with significant differences with respect to the other two. 
This performance was repeated at 30 and 45 days. When the final days of 
research were reached, substitution levels 0, 6 and 12 showed no 
differences among them, being T3 the one with the lowest value. The 
lowest weight of animals was always obtained in the treatment that 
consumed the highest amount of Azolla meal.
				
Table 5. 
			
Performance of live weight (g) per treatments during 60 days of experiment

 abcDifferent letters in the same column indicate significant differences for (p< 0.05) according to Duncan (1955)
							
Daily mean gain (DMG) showed its best results
 in the first 15 days of observation for control and T2 treatments. For 
the second evaluated stage, there were no differences between the zero 
level of inclusion and 12 % of HA. When evaluating the third stage, T0 
and T2 treatments did not differ between them and, at 45-60 days, T0 and
 T3 treatments did not show significant differences between them. 
Throughout the studied stage, the highest percentage of the highest HA 
inclusion (T3) presented the lowest gains (table 6).
				
Table 6. 
			
Performance of daily mean gain (g) per treatments

 abcDifferent letters in the same column indicate significant differences for (p< 0.05) according to Duncan (1955)
							
The increase of total weight (WG) at the end 
of the experiment showed the best results for control and T2 treatments,
 and the lowest for T3. For food conversion (FC), the aforementioned 
treatments showed no differences among them, while food efficiency (FE) 
showed the best results for the first three treatments, without 
significant differences among them. For the three evaluated variables, 
the lowest results were obtained in the treatment T3 with the highest HA
 content (table 7).
				
Table 7. 
			
Weight gain, food conversion and efficiency per treatments
The
 peculiarities of the digestive system of rabbits allow the use of food 
that, for other non-ruminant species, generate low productivity, as this
 species achieves profitable use of fibrous sources in the diet (Nieves et al. 2009b), due to fermentation in the caecum. In addition, the process of cecotrophy maximizes the use of food (Nieves et al. 2009a).
 This research showed that Azolla meal, with a dry matter superior to 90
 %, is a suitable food for rabbits, starting from its specific 
characteristics, fundamentally by fiber percentage, since this produces 
increase in the intake, to maintain the digestible energy intake (Caro and Dihigo 2012).
On
 the other hand, CP value was higher than 20 %, and fiber reached 29 %. 
It is important to note that Azolla is characterized by its richness in 
protein and ash, so it should be expected to be rich in fiber fractions,
 although it is not considered that the cell wall is lignified in the 
same way as in terrestrial plants, where it is necessary to have rigid 
support structures (Méndez et al. 2018a). 
Other
 results in the consulted literature refer to values similar to those in
 this research, when Azolla plant was studied as an alternative feed for
 aquaculture (Méndez et al. 2018a). These authors reported 22 % content for this nutrient and noted that this value is in the range referred for this plant (Parashuramulu et al. 2013 and Bhaskaran and Kannapan 2015). These high CP contents are favored by plant mechanisms for fixing nitrogen and later include it into its biomass (Lumpkin and Plucknett 1982).
The contents of calcium and phosphorus are similar to those reported by Méndez et al. (2018a)
 when evaluating the Azolla plant as an alternative food for monogastric
 animals. These authors found values of 4.59 and 0.56 % for Ca and P, 
respectively, stating that the low phosphorus content found in this 
species explains the importance of supplementation with this element for
 an adequate plant growth (De Waha et al. 2001).
On
 the other hand, the results of the present study showed adequate 
contents of different amino acids, ratifying what was reported by Becerra et al. (1990) and Leng et al. (1995),
 by pointing out that Azolla has an appropriate amino acid balance, 
which facilitates its use for feeding fish, crustaceans and other 
species. Other studies reported the importance of amino acids for 
monogastric species, highlighting that methionine and lysine 
concentration in the ration should be adequate, since they intervene in 
the animal development, and, specifically, methionine below 14 %, can be
 the cause of growth delay (Gaber 2006 and Ngugi et al. 2017).
It
 is important to highlight that protein level of the plant under study 
is high, and a good quality in terms of amino acids, essential compounds
 in the monogastric diet. This is explained by the fact that this plant 
is mainly composed of metabolically active material, since it does not 
need to develop structural and support material (Adelakun et al. 2016).
Azolla
 is one of the most used aquatic plants for animal feeding. Different 
studies demonstrate the use of Azolla in animal rations, notifying that 
it decreases diet costs up to 40 % (Méndez et al. 2018a).
 Other studies mention that the inclusion of Azolla as a food in the 
diet reduces the cost of the ration by 25% without affecting the yield 
of species such as pigs, fish, birds and rabbits (Gangadhar et al. 2015 and Kollah et al. 2015), which justifies this research.
Results of this research, when evaluating productive indicators of Oryctolagus cuniculus
 species for 60 days, showed intake of DM, CP, and ME of Azolla, 
different in all the evaluated treatments, due, among other aspects, to 
the percentage of inclusion of CC and HA in the ration. Results in 
different monogastric species refer to favorable intake of this plant (Becerra et al. 1990).
 These authors express that there is no disadvantage in behavioral 
traits when the animals are supplied with up to a third of the diet in 
the form of Azolla, and more importantly, prepared in different ways. 
This may explain what happened in this study.
For
 CP and ME, there are differences in their intake, because the 
percentages of HA inclusion are different in the evaluated treatments. 
It should be noted that the contributions of CP by Azolla are high, 
starting from its chemical composition, where it reaches up to 20, 74 by
 17.6 of CC, in addition to protein quality, factors that influence the 
intakes of these nutrients (Ponce de León 2003).
 To this is added that this plant maintains a symbiotic relationship 
with the cyanobacteria. This fact makes the Azolla tend to contain 
relatively high levels of N and be an attractive protein source for 
animal feed, not only for cattle and poultry, but also for other species
 (Ponce and Fitz 2004 and Méndez et al. 2018b).
When
 12 % of HA was included in the diet, the weights were increased to 
2,258.78g at 60 days, without differences with the control (table 5),
 which could be attributed, among other aspects, to the percentages of 
protein in the diet. Studies conducted in Cuba reported similar values 
to include Agave tequilana in the diet (Isert et al. 2016),
 referring that when these animals are fed with vegetable meals, they do
 not present digestive problems and productive indicators are increased (García et al. 2012). Daily mean gains obtained in this research (table 6) are higher than those reported by other authors, by substituting up to 20 % of the commercial concentrate for legume meal (Caro and Dihigo 2012) and by using s ugarcane in the ration (Vázquez et al. 2016).
Another study reflected daily mean gains below those shown in this study (Ayorinde and Oluwatosin 2012). These authors found values close to 13 g, with the inclusion of forage diet ad libitum
 and restriction of the commercial concentrate. However, the CP and CF 
values of the diet were lower than those of this study, which could 
influence the results. This confirms the findings of Caro and Dihigo (2012),
 who stated that animal response can be affected by multiple factors. 
Therefore, animal growth can be influenced by diet quality, 
environmental conditions and aspects inherent in genetics.
It
 is important to note that, for the DMG, there are no differences 
between CC and 12 % of HA inclusion. This could be related to the 
composition of the diet for these treatments, as well as quality. In the
 increase of total weight per treatment (table 7),
 it was possible to appreciate the differences of T0 and T2 with respect
 to the other treatments, which could be due to a better use of the 
diet, because of its composition (Macías and Usca 2017).
Food conversion is a practical measure to estimate efficiency with which animals use the ingested food for growth purposes (Caro and Dihigo 2012). In this study, food conversion demonstrated that the inclusion of 12 % of Azolla meal (table 7)
 did not decrease this indicator with respect to the control, 
determined, among other aspects, by intake and weight gain in this 
treatment. Results of Núñez et al. (2017)
 are inferior to those of this research, who reported values between 7 
and 8 for rabbits of this category when using oat in the diet, which 
could influence these results.
Azolla meal has a 
suitable chemical composition to be used in the feeding of rabbits. The 
inclusion of up to 12 % of this meal in the ration for rabbits did not 
affect the evaluated productive indicators. Studies are needed to 
evaluate economic indicators and meat quality when using the inclusion 
of HA in the diet.
La
 productividad de las plantas está determinada por un grupo de factores 
inherentes al vegetal y externos. En el primer grupo se encuentran sus 
características biológicas y en el segundo, el suelo, clima y manejo (Herrera et al. 2017).
 Estos aspectos cobran particular importancia en la actualidad, debido 
al elevado precio de las materias primas para la producción de alimentos
 concentrados y de los fertilizantes (Friedrich 2014).
La
 búsqueda de alimentos alternativos para la producción animal, dirigido a
 la utilización de los recursos naturales disponibles, constituye 
importante aspecto a tener en cuenta en la actualidad (Arorav and Singh 2003)
 y establece uno de los mayores desafíos para encontrar fuentes de 
proteínas de fácil adquisición, capaz de cubrir las necesidades 
nutritivas de las especies no rumiantes y que tengan bajo costo. Entre 
las posibles alternativas se encuentran las macrofitas acuáticas tales 
como la Azolla, con resultados prometedores (Narayan 2011).
 Por lo general, estas plantas son opciones que en el trópico se 
presenta para el desarrollo de sistemas apropiados y rentables desde el 
punto de vista ambiental, económico y humano. Además, la incorporación 
de esta planta en la dieta de monogástricos puede desempeñar un papel 
muy importante, debido a que posee entre 17 y 18 % de proteína, bajos 
tenores de fibra (34 % de fibra detergente neutro - FDN) y alrededor de 
90 % de digestibilidad de la materia seca (Buenaño et al. 2018).
Por
 otra parte, la producción de conejos constituye una importante 
alternativa para la obtención de proteína de consumo humano, debido a su
 alta prolificidad, bajo intervalo generacional y alto rendimiento de 
carne, con bajo contenido de colesterol (Petracci y Cavani 2013).
 Sin embargo, la alimentación de los conejos se enfrenta a diversas 
problemáticas, entre las que destaca la poca disponibilidad de insumos 
baratos, así como el alto costo de los alimentos concentrados 
comerciales, lo que alienta la búsqueda de estrategias basadas en el uso
 de materias primas no convencionales (Silva 2016).
Por ello, el objetivo de este trabajo fue determinar la composición química de la harina de Azolla filiculoides y evaluar los indicadores productivos en conejos, al sustituir en la dieta parte del concentrado comercial por esta planta.
Localización del área de estudio. El experimento se desarrolló entre los meses de febrero a julio, en el municipio Río Cauto, de la provincia de Granma, Cuba. Cultivo de la Azolla y producción de la harina (HA).
 Para la producción de Azolla se habilitaron dos piscinas de 7 m de 
ancho por 10 m de largo y profundidad de 1.30m cada una y representaron 
un área total de 140 m2. En cada piscina se plantaron 200 g/m2 de 
material fresco Arzolla y se depositaron 65 kg de estiércol vacuno en 
diferentes partes de cada depósito. La cosecha se realizó de forma 
manual, con intervalos de 7 días, una vez que se constató que toda la 
superficie del estanque estaba cubierta por una biomasa verde 
característica de la especie cultivada (Méndez et al. 2018a). 
Se
 cosechó el 75 % de las plantas y se secaron al sol durante 72 horas 
sobre mantas de polietileno, contando con una superficie total para el 
secado de 16 m2. Se realizaron entre 6-7 volteos desde las 7:00 a.m. 
hasta las 7:00 p.m. Se trituraron utilizando un molino de martillo con 
criba de 0.8 cm. El material obtenido se envasó en sacos de polietileno y
 almacenó en una habitación a temperatura ambiente.
Concentrado comercial (CC).
 Este se adquirió en la Fábrica de Piensos de Bayamo (certificado), a 
través de la Empresa de Ganado Menor (EGAME) formulado para la 
alimentación de conejos y su composición química aparece en la tabla 1.
					
Table 1. 
			
Chemical composition of commercial concentrate expressed in percentage
Procedimiento experimental. Se 
seleccionaron 48 animales machos destetados de la raza Pardo cubano, 
clínicamente sanos, con 38 ±3 días de edad y peso inicial promedio de 
646.6 ± 9.5g, los cuales se sometieron a 15 días de adaptación al cambio
 de alimentación para evitar alteraciones por causa del estrés que 
pueden sufrir en esta primera etapa. El experimento duró 60 días.
Tratamientos y diseño experimental.
 Se realizó el balance de los nutrientes de cada tratamiento para la 
sustitución de diferentes niveles del concentrado comercial (0, 8, 12 y 
18 %) por harina de Azolla filiculoides. Se utilizó un diseño 
completamente aleatorizado, divididos en cuatro grupos, con tres 
réplicas cada uno y cuatro animales como unidades experimentales. Los 
tratamientos fueron: T0, 100 % concentrado comercial; T1, 94% de 
concentrado comercial y 6 de harina de Azolla (94% CC+ 6 HA); T2: 88 % 
de concentrado comercial y 12 de harina de Azolla (88 % CC+ 12 HA) y T3,
 82 % de concentrado comercial y 18 de harina de Azolla (82 % CC+ 18 
HA).
Manejo de la alimentación. El 
suministro de alimentos se realizó dos veces al día (8:30 a.m y 5:00 
p.m). Para ello se utilizaron comederos circulares de barro con 15 cm de
 diámetro y 7 cm de altura. Se realizaron cálculos semanalmente para 
ajustar el consumo de los alimentos (HA y CC) en correspondencia con el 9
 % del peso vivo (Maertens y Villamide 1998), cumpliendo además con las normas de consumo descritas por NRC (1990) (tabla 2).
					
Table 2. 
			
Requirements of animals and contributions of experimental diets
El agua se ofreció ad libitum, 
utilizando recipientes de barro de forma circular con una dimensión de 
16 cm de diámetro inferior, 13 cm de superior y 7 cm de altura, con 
capacidad para almacenar un volumen del líquido igual a 800 mL ± 200, 
estos se lavaban diariamente y cada dos días se colocaban al sol para 
evitar la proliferación de agentes patógenos.
Variables evaluadas para la harina de Azolla.
 Se determinaron: materia seca (MS), proteína bruta (PB), fibra (FB), 
extracto etéreo (EE), cenizas, extracto libre de nitrógeno (ELN), Ca y P
 según AOAC (2016) y energía metabolizable estimada según NRC (1990).
 Además, se cuantificaron los aminoácidos: treonina, valina, metionina, 
isoleucina, leusina, lisina, histidina, arginina y triptofano (Dewanji 1993). Cada muestra se analizó por triplicado
Indicadores evaluados en los animales.
 La fase experimental tuvo 60 días de duración y se determinaron el peso
 vivo inicial, parcial y final, ganancia media diaria y conversión 
alimentaria. El pesaje de los animales (0, 15, 30, 45 y 60 días) y de 
los alimentos se realizó de 8:00 am a 9:00 am, en balanza con precisión 
de 0.1 g. Los indicadores productivos para esta categoría, se midieron 
de forma individual.
La ganancia media se calculó
 mediante la diferencia entre el peso final (PF) y el peso inicial (PI) 
dividido entre el tiempo según: GM = (PF - PI)/tiempo
El incremento en peso diario se estableció mediante la fórmula: IPD = PF - PI
El
 consumo de alimento (CA) se calculó mediante la diferencia de la oferta
 menos el rechazo, pesado dos veces al día (7:00 am y 4:00 pm) según: CA
 = Alimento sumistrado - Alimento rechazado
La 
eficiencia alimentaria (EA) se refirió a la ganancia de peso en relación
 con el alimento consumido de acuerdo con: EA = Peso ganado/Consumo.
El
 factor de conversión alimentario (FCA) se refirió como el alimento 
consumido en relación con la ganancia de peso, mediante: FCA = Alimento 
consumido / Ganancia en peso
Análisis estadístico.
 Los datos se procesaron mediante análisis de varianza de clasificación 
simple con nivel de significación de p<0.05. Para comprobar la 
normalidad de los datos, se empleó la prueba de Kolmogorov-Smirnov (Massey 1951) y para la homogeneidad de varianzas se utilizó la de Bartlett (Bartlett 1937). La comparación múltiple de las medias ajustadas se realizó mediante Duncan (1955).
Los resultados de la composición química de la harina de Azolla (tabla 3)
 mostraron altos valores de MS, componente que garantiza que esta planta
 en forma de harina pueda conservarse y almacenarse para alimentar 
conejos. Por otra parte, aparece alto contenido de PB, con la presencia 
de aminoácidos importantes para la especie, así como valores de energía 
metabolizable y fibra bruta.
					
Table 3. 
			
Chemical composition of Azolla filiculoides meal, expressed in percentage
La planta presentó buen balance de 
aminoácidos esenciales, de gran importancia para el desarrollo y 
crecimiento de la especie en estudio, además de provenir de una fuente 
más barata que el concentrado comercial.
El 
consumo de materia seca y nutrientes (PB, EM), tanto para el concentrado
 como la HA, reflejó diferencias entre los tratamientos evaluados (tabla 4).
 Para el caso específico de la MS, los mayores consumos aparecen para 
los tratamientos T1y T2, sin diferencias entre ellos y si con los 
restantes. Sin embargo, el mayor consumo para la HA lo mostró T3, donde 
aparece el porcentaje de inclusión más alto. Para el consumo total de la
 PB, el valor más alto lo presentó el tratamiento control, con 
diferencias significativas respecto a los restantes. Similar 
comportamiento aparece al evaluar solamente el concentrado. Para el caso
 específico de la HA el mayor valor aparece para T3. Al evaluar el 
consumo de la EM, se mostraron resultados similares a los de la proteína
 bruta.
					
Table 4. 
			
Intake of dry matter and nutrients (CP and ME) of commercial concentration (CC) and HA. 

 abcd Different letters in the same column indicate significant differences for (p< 0.05) according to Duncan (1955)
								
En el incremento de peso según avanzó el experimento, se pudo apreciar (tabla 5)
 que los pesos iniciales no mostraron diferencias entre ellos. Sin 
embargo, a los 15 días, los mayores resultados los presentó el 
tratamiento control y T2, con diferencias significativas respecto a los 
dos restantes. Este comportamiento se repitió a los 30 y a los 45 días. 
Cuando se alcanzaron los días finales de la investigación los niveles de
 sustitución 0, 6 y 12 no mostraron diferencias entre ellos, siendo T3 
el de menor valor. El menor peso de los animales siempre se obtuvo en el
 tratamiento que consumió mayor cantidad de harina de Azolla.
					
Table 5. 
			
Performance of live weight (g) per treatments during 60 days of experiment

 abcDifferent letters in the same column indicate significant differences for (p< 0.05) according to Duncan (1955)
								
La ganancia media diaria (GMD) mostró sus 
mejores resultados en los primeros 15 días de observación para los 
tratamientos control y T2. Para la segunda etapa evaluada no se 
mostraron diferencias entre el nivel de inclusión cero y el 12 % de HA. 
Al evaluar la tercera etapa los tratamientos T0 y T2 no difirieron entre
 si y a los 45-60 días los tratamientos T0 y T2 no presentaron 
diferencias significativas entre ellos. En toda la etapa estudiada el 
mayor porcentaje de la mayor inclusión de la HA (T3) presentó las 
ganancias más bajas (tabla 6).
					
Table 6. 
			
Performance of daily mean gain (g) per treatments

 abcDifferent letters in the same column indicate significant differences for (p< 0.05 according to Duncan (1955)
								
El incremento de peso total (IP) al concluir
 el experimento reflejó los mejores resultados para los tratamientos 
control y T2, y los más bajos para T3. Para la conversión alimentaria 
(CA) los tratamientosantes mencionados no mostraron diferencias entre 
ellos, mientras que la eficiencia alimentaria (EA) mostró los mejores 
resultados para los tres primeros tratamientos, sin diferencias 
significativas entre si. Para las tres variables evaluadas los menores 
resultados se obtuvieron en el tratamiento (T3) con el mayor contenido 
de HA (tabla 7).
					
Table 7. 
			
Weight gain, food conversion and efficiency per treatments
Las
 particularidades del sistema digestivo de los conejos permite la 
utilización de alimentos que, para otras especies no rumiantes, generan 
baja productividad, pues esta especie logra provechosa utilización de 
fuentes fibrosas en la dieta (Nieves et al. 2009b), debido a la fermentación en el ciego. Además, el proceso de cecotrofia maximiza el aprovechamiento del alimento (Nieves et al. 2009a).
Esta
 investigación demostró que la harina de Azolla con una materia seca 
superior a 90 %, es un alimento adecuado para el conejo, partiendo de 
sus características específicas, fundamentalmente por el por ciento de 
fibra, ya que esta produce incremento en el consumo, para mantener el 
consumo de energía digestible (Caro y Dihigo 2012).
Por
 otra parte, el valor de PB fue superior a 20 %, y la fibra alcanzó 29 
%. Es importante desatacar que la Azolla se caracteriza por su riqueza 
en proteína y cenizas, por lo que se debe esperar que sea rica en 
fracciones de fibra, aunque no se considera que la pared celular esté 
lignificada de la misma manera que en las plantas terrestres, donde es 
necesario poseer estructuras rígidas de sostén (Méndez et al. 2018a)
Otros
 resultados en la literatura consultada refieren valores similares a los
 de esta investigación, cuando se estudió la planta Azolla como alimento
 alternativo para la acuicultura (Méndez et al. 2018a).
 Estos autores notificaron tenores de 22% para este nutriente y 
señalaron que este valor está en el rango referido para esta planta (Parashuramulu et al. 2013 y Bhaskaran y Kannapan 2015).
 Estos altos contenidos de PB están dados por los mecanismos que tiene 
el vegetal de fijar nitrógeno e incorporarlo posteriormente a su biomasa
 (Lumpkin y Plucknett 1982).
Los contenidos de calcio y fósforo son similares a los notificados por Méndez et al. (2018a)
 al evaluar la planta de Azolla como alimento alternativo para animales 
monogástricos. Estos autores encontraron valores de 4.59 y 0.56 % para 
el Ca y el P, respectivamente manifestando que el bajo contenido de 
fósforo encontrado en esta especie, explica la importancia de la 
suplementación con este elemento para el adecuado crecimiento de la 
planta (De Waha et al. 2001).
Por
 otro lado, los resultados del presente trabajo mostraron tenores 
adecuados de diferentes aminoácidos, ratificando lo notificado por Becerra et al. (1990) y Leng et al. (1995),
 al señalar que la Azolla presenta apropiado balance aminoacídico lo que
 posibilita su empleo en la alimentación de peces, crustáceos y otras 
especies. Otros estudios notificaron la importancia de los aminoácidos 
para las especies monogástricas, resaltando que la concentración de 
metionina Y lisina en la ración debe ser adecuada, ya que estas 
intervienen en el desarrollo del animal, y específicamente la metionina 
por debajo del 14 %, puede ser la causa del retardo en el crecimiento (Gaber 2006 y Ngugi et al. 2017).
Es
 importante resaltar que el nivel proteico de la planta en estudio es 
alto y de calidad en términos de aminoácidos, compuestos indispensables 
en la dieta de monogástricos. Esto se explica por el hecho de que la 
planta se compone, fundamentalmente, de material metabólicamente activo,
 pues no necesita desarrollar material estructural y e soporte (Adelakun et al. 2016).
La
 Azolla es una de las plantas acuáticas ampliamente empleada en la 
alimentación animal. Diferentes estudios reflejan la utilización de la 
Azolla en las raciones para animales, notificando que esta disminuye los
 costos de las dietas hasta 40 % (Méndez et al. 2018a).
 Otros estudios refieren, que la incorporación de la Azolla como 
alimento en la dieta reduce el costo de la ración en 25% sin afectar el 
rendimiento de especies como los cerdos, peces, aves y conejos (Gangadhar et al. 2015 y Kollah et al 2015) aspecto que justifica esta investigación.
Los resultados de la presente investigación al evaluar durante 60 días los indicadores productivo de la especie Oryctolagus cuniculus
 mostraron consumos de MS, PB, y EM de la Azolla diferentes en todos los
 tratamientos evaluados, dado entre otros aspectos por los porcientos de
 inclusión del CC y la HA en la ración. Resultados en diferentes 
especies monogástricas refieren consumos favorables de esta planta (Becerra et al. 1990).
 Estos autores expresan que no existe desventaja en los rasgos de 
comportamiento cuando se suministra a los animales hasta una tercera 
parte de la dieta en forma de Azolla, y lo que es más importante, 
preparada de distintas formas. Esto puede explicar lo ocurrido en este 
trabajo.
Para la PB y la EM, se aprecian 
diferencias en su consumo, debido a que los porcientos de inclusión de 
la HA son diferentes en los tratamientos evaluados. Destacar que los 
aportes de PB por la Azolla son altos, partiendo de su composición 
química, donde alcanza hasta 20, 74 por 17,6 del CC, además de la 
calidad de la proteína, factores que influyen en los consumos de estos 
nutrientes (Ponce de León 2003). A esto se 
añade que esta planta mantiene una relación simbiótica con la 
cianobacteria. Este hecho hace que la Azolla tienda a contener niveles 
relativamente altos de N y ser una fuente proteica atrayente para la 
alimentación animal, no solamente del ganado y en la avicultura, sino 
también en otras especies (Ponce y Fitz, 2004 y Méndez et al. 2018b).
Al
 incluir en la dieta 12 % de HA se incrementaron los pesos hasta valores
 de 2 258.78g a los 60 días, sin diferencias con el control (tabla 5)
 lo que se pudiera atribuir, entre otros aspectos, a los porcentajes de 
proteína de la dieta. Trabajos realizados en Cuba, notificaron valores 
similares al incluir en la dieta el Agave tequilana (Isert et al. 2016),
 refiriendo que cuando estos animales son alimentados con harinas de 
vegetales no presentan problemas digestivos y se incrementan los 
indicadores productivos (García et al. 2012).
Las ganancias medias diarias obtenidas en esta investigación (tabla 6)
 son superiores a las notificadas por otros autores, al sustituir hasta 
el 20% del concentrado comercial por harina de leguminosa (Caro y Dihigo 2012) y al emplear caña de azúcar en la ración (Vázquez et al. 2016).
Otro estudio reflejó ganancias medias diarias por debajo de las mostradas en este trabajo (Ayorinde y Oluwatosin 2012). Estos autores encontraron valores cercanos a los 13 g, al incluir en la dieta forraje ad libitum
 y restringir el concentrado comercial. Sin embargo, los valores de PB y
 FB de la dieta fueron más bajos que los de este trabajo, lo que pudo 
influir en los resultados. Esto corrobora lo planteado por Caro y Dihigo (2012)
 que la respuesta animal puede afectarse por múltiples factores. Por 
tanto, el crecimiento de los animales puede estar influenciado por la 
calidad de la dieta, condiciones ambientales y aspectos inherentes a la 
genética.
Es importante destacar que para la GMD 
no se aprecian diferencias entre el CC y el 12 % de inclusión de la HA. 
Esto pudo tener relación con la composición de la dieta para estos 
tratamientos, así como la calidad.
En el incremento de peso total por tratamiento (tabla 7)
 se pudo apreciar las diferencias de T0 y T2 con respecto a los 
restantes tratamientos, lo que pudo deberse al mejor aprovechamiento de 
la dieta, por la composición de esta (Macías y Usca 2017).
La
 conversión alimentaria es una medida práctica para estimar la 
eficiencia con que los animales utilizan el alimento ingerido para fines
 de crecimiento (Caro y Dihigo 2012). En este estudio la conversión alimentaria reflejó que la inclusión de 12 % de harina de Azolla (tabla 7)
 no disminuyó este indicador respecto al control, determinado entre 
otros aspectos por el consumo y la ganancia de peso en este tratamiento.
 Los resultados de Núñez et al. (2017)
 son inferiores a los de esta investigación, ellos notificaron valores 
entre 7 y 8 para conejos de esta categoría al emplear avena en la dieta,
 factor que pudo influir en estos resultados.
La 
harina de Azolla posee una composición química adecuada para utilizarse 
en la alimentación de conejos. La inclusión de hasta 12 % de esta harina
 en la ración para conejos, no afectó los indicadores productivos 
evaluados. Se precisan realizar estudios para evaluar los indicadores 
económicos y la calidad de la carne al emplear en la dieta la inclusión 
de la HA.